Метод Кьельдаля, метод быстрого измерения количественного содержания азота в различных объектах (чаще всего в органических соединениях, природных объектах, тканях организма, твердых топливах и проч.). Метод назван в честь датского химика Йохана КЬЕЛЬДАЛЯ (1849-1900). Метод включает в себя несколько стадий:
Этим методом, например, определяют количество азота в любой жидкости и ткани организма. По количеству азота можно судить о содержании белка в исследуемых объектах.
Впервые метод Кьельдаля был применен для определения азота в мясе и различных тканях без предварительного их высушивания и обезжиривания великим русским физиологом И. П. Павловым совместно с Д. П. Павловым.
Сущность метода определения общего количества азота сводится к мокрому озолению органических веществ образца серной кислотой при нагревании в присутствии катализаторов. Катализатор выбирают в зависимости от типа пробы (обычно сульфат меди, иногда добавляют селен). В процессе озоления органические вещества окисляются до CO2, H2O, SO2, а азот превращается в аммоний, и при реакции с серной кислотой образуется (NH4)2SO4. Часть серной кислоты, окисляющей органические вещества, восстанавливается до SO2.
На второй стадии аммиак из сернокислого аммония вытесняется щелочью по реакции:
и отгоняется в титрованную кислоту.
На последней стадии оставшуюся кислоту оттитровывают. По количеству связавшейся с аммиаком кислоты судят о количестве азота.
В настоящий момент быстро развивается приборное оформление различных химических методов анализа, обеспечивающее частичную или полную автоматизацию для ускорения и устранения ошибок анализа.
Первую стадию можно проводить классическим методом на плитке под тягой. Такой подход вполне оправдан при анализе одного образца. Этот подход наиболее дешев, но связан с необходимостью аккуратного проведения всех операций и требует времени и повышенного внимания экспериментатора.
При наличии большого количества образцов существенно более удобно разложение проводить в специализированных графитовых блоках, обеспечивающих равномерный нагрев сосудов с образцом по всей площади и удаление газообразных продуктов разложения.
Мы предлагаем полный спектр оборудования для определения азота по методу Кьельдаля:
Для второй и третьей стадии:
Для титрования (только 3-я стадия):
Для лабораторий в которых происходит постоянный анализ большого количества образцов мы рекомендуем автоматический анализатор K1100F с блоком разложения SH220N. Такая система обеспечит Вам автоматизированный точный анализ с минимальными время и трудозатратами в расчете на один образец.
Метод Кьельдаля: сущность, стандарты, образцы, оборудование
Метод Кьельдаля — один из самых распространённых способов количественного определения азота в органических веществах. Его используют для определения белков (или других азотсодержащих органических веществ) в мясной и молочной продукции, соках, сырах, пиве, кондитерских изделиях, зерновых и бобовых культурах, лекарственных средствах.
Сущность метода
Датский химик Йохан Кьельдаль создал метод определения общего азота ещё в 1883 году. С тех пор принципиально в методе ничего не поменялось — полученные результаты отличаются точностью и хорошей воспроизводимостью. Все усовершенствования направлены на ускорение процесса (в основном на подбор новых нетоксичных катализаторов) и автоматизацию стадий.
Определение азота в пробе проходит в три этапа.
Органическую пробу, особым образом подготовленную, нагревают с серной кислотой в присутствии катализатора (CuSO4, солей ртути или каких-то других катализаторов, которые обязательно указаны в стандарте). При этом связанный азот (в виде амино-, амидо-, нитро-, нитрозо-, азо-, азокси-групп) переходит в сульфат аммония (NH4)2SO4. Этот процесс называется озолением или минерализацией.
Затем полученный раствор подвергают воздействию концентрированной щёлочи. В результате реакции высвобождается аммиак.
Полученный аммиак отгоняют в приёмную колбу, в которой находится борная кислота, связывающая его в лабильный комплекс.
На третьем этапе анализа полученный аммиак титруют серной или азотной кислотой. Полученные результаты титрования используют для вычисления массовой доли общего азота и дальнейших расчётов (например, количества общего белка).
Вот так выглядела установка Кьельдаля во времена Кьельдаля
Стандарты
Метод Кьельдаля на сегодняшний день является референтной методикой измерений. Это значит, что результаты измерения могут использоваться для оценки правильности измеренных значений величины, полученных по другим методикам, а также для калибровки или определения характеристик стандартных образцов.
Общие указания по определению содержания азота методом Кьельдаля приведены в ГОСТ 26889-86 (он до сих пор действующий, последняя редакция была 1 марта 2010 года). В нём приведены рекомендации по проведению анализа, но указано, что отдельные моменты могут быть приведены в более специализированных стандартах.
Все эти стандарты оговаривают, что вместо стандартной стеклянной установки Кьельдаля можно использовать автоматическое оборудование.
Оборудование для анализа по Кьельдалю
Для облегчения и ускорения анализа существует целый комплекс оборудования, которое позволяет значительно упростить работу лаборанта, минимизировать возможные ошибки определения и проводить одновременно серию анализов.
Минерализация
Для осуществления минерализации (первого этапа в анализе) были разработаны специальные сжигатели, которые называют дигесторами (или просто приборами для разложения проб). Они позволяют проводить минерализацию при точной и высокой температуре. Оптимальной температурой для процесса считается 360-380 °С, так как уже при 390 °С начинаются первые потери азота, а при более низких температурах реакция не даёт стопроцентного выхода. Но различные стандарты определяют свою температуру для разных образцов, и она может быть выше: например по ГОСТ 54662-2011 для анализа сыров требуется температура минерализации 420±10 °С, а для анализа молока по ГОСТ 34454-2018 нужен нагрев до 450-500 °С.
Дигесторы позволяют одновременно подготавливать несколько проб, обычно 4, 6, 8 или 12. Объём пробы составляет порядка 200-250 мл. Есть дигесторы, рассчитанные на больший объём пробы: Gerhardt TURBOTHERM TTs 625 позволяет работать с пробами до 300 мл, а TTs 480 до 800 мл.
К дигестору обязательно прилагается скруббер — прибор, который будет улавливать и очищать пары. Он конденсирует агрессивные кислотные пары, нейтрализует их в щёлочи и затем разбавляет водой.
Всё многообразие установок для разложения проб от Gerhardt
Дистилляция
Для ускорения второго этапа — дистилляции — существуют специальные дистилляционные аппараты, которые оснащены встроенным парогенератором и устройством для автоматической подачи в дистилляционную колбу необходимых количеств щёлочи и воды. Дистилляция занимает всего 3-5 мин. В зависимости от степени автоматизации (то есть сложности и стоимости дистиллятора), дистилляторы могут добавлять заданное количество воды и щёлочи, борной кислоты и даже (если они совмещены с титратором) автоматически проводить титрование и выдавать готовый результат. В моделях Gerhard VAPODEST 200, Beger SDU 100 и LOIP LK-500 пользователь задаёт необходимое количество добавляемой щёлочи и время дистилляции, в VAPODEST VAP 300 можно ещё регулировать количество воды для охлаждения, а VAP 400 в дополнение ко всему позволяет добавить нужное количество борной кислоты.
Различные модели VAP
Титрование
Последний этап анализа — это кислотно-основное титрование аммиака серной кислотой. Борная кислота образует лабильный комплекс с аммиаком. Её добавляют только для того, чтобы избежать потерь аммиака вследствие его испарения, и в титровании она не участвует. Конечную точку титрования можно определить вручную, но намного проще и точнее использовать автоматический титратор. Есть приборы, которые совмещают дистиллятор и титратор, к примеру, у VAP 450 есть внешний титратор и ПО, которое посчитает готовый результат.
Если позволяют средства, то лаборатория может приобрести полностью автоматизированный комплекс для анализа методом Кьельдаля. В работе с ним участие человека сводится к взвешиванию образца и размещению навески в минерализационной колбе, всё остальное комплекс сделает сам.
Полученные результаты анализа выражают в пересчёте на азот (N). Если делается пересчёт на содержание общего белка, то обязательно указывают коэффициент пересчёта. Этот коэффициент и формулировки расчёта будут зависеть от стандарта, по которому проводятся измерения.
Автоматический дистилляционный комплекс
Нужна помощь в подборе оборудования? Менеджеры компании «НВ-Лаб» помогут выбрать оборудование исходя из методик и стандартов, использующихся конкретно в вашей лаборатории. Звоните или пишите:
ВНЕСЕН Государственным агропромышленным комитетом СССР
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 7 мая 1986 г. N 1185
3. Ограничение срока действия снято Постановлением Госстандарта N 2216 от 26.12.91
4. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2010 г.
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, содержащие белки и другие азотосодержащие органические вещества, в которых азот при минерализации в присутствии серной кислоты превращается в ионы аммония, количество которых пропорционально определяемому содержанию азота, и устанавливает общие указания по определению содержания азота в пищевых продуктах методом Кьельдаля, а также требования к аппаратуре, применяемой для проведения анализа.
Настоящий стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 5214-85 и является обязательным методическим документом при разработке нормативно-технической документации по определению азота методом Кьельдаля.
1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Метод заключается в разрушении органического вещества нагреванием с серной кислотой в присутствии катализатора, добавлении избытка гидроокиси натрия, перегонке и титровании освободившегося аммиака.
2. ПРОБА ДЛЯ АНАЛИЗА
Так как пробы многих продуктов животного и растительного происхождения (в особенности пищевых продуктов) не могут быть в условиях лаборатории доведены до абсолютно однородного состояния, рекомендуется использовать макрометоды.
Образцы для анализов, размер которых может изменяться в зависимости от предполагаемого содержания азота, должны быть показательными для пробы и содержать от 0,005 до 0,2 г азота, оптимально более 0,02 г.
Если продукт недостаточно однороден, образец для анализа должен быть большим (свыше 1 г), и при высоком содержании азота определение проводится из аликвотных частей жидкости, получаемой после разрушения органического вещества.
Образцы для анализа отвешивают или отмеривают с погрешностью не более 0,1%. При анализе вязких или пастообразных продуктов образец можно поместить в небольшую стеклянную пробирку, в колбу или на алюминиевый, бумажный или пластмассовый лист, который не содержит азота или его содержание заранее известно.
3. РАЗРУШЕНИЕ ОРГАНИЧЕСКОГО ВЕЩЕСТВА
Серная кислота, используемая при анализе, практически не должна содержать соединений азота.
Количество кислоты следует устанавливать для каждого вида анализируемого продукта отдельно. Следует избегать избыточного количества кислоты.
Необходимо делать различие между веществами, используемыми для повышения температуры кипения жидкости при разрушении органических веществ, и истинными катализаторами, которые способствуют этому разрушению. К первой группе веществ относится обычно сернокислый натрий, но предпочтительнее использовать сернокислый калий. Эти вещества вносят в достаточном количестве, чтобы повысить температуру кипения в конце процесса разрушения до 360-380 °С.
Выбор катализатора должен быть указан в стандартах на конкретный вид продукции. Можно применять различные виды катализаторов, имеющих достаточную эффективность и отвечающих требованиям контрольных испытаний (например, Hg, Se, Cu и их соединения).
Если проба имеет вид порошка, рекомендуется смешивать ее с катализатором еще в сухом виде до приливания серной кислоты.
Начало нагревания является критическим моментом метода Кьельдаля. Во многих случаях появляется пена, которая может подняться в горлышко колбы или даже перелиться через край. На это обстоятельство следует обратить особое внимание и вначале обеспечить умеренное нагревание. Иногда рекомендуется добавлять вещества, предотвращающие появление пены, например, парафин или вещества, изменяющие поверхностное натяжение. В этом случае следует убедиться, что эти вещества не содержат азота.
Если источник тепла интенсивно излучает инфракрасные лучи, то вещества, которые обычно вызывают пенообразование (например, углеводороды), образуют вместо этого обуглившиеся массы, которые дольше растворяются, но зато не создают сильной пены. В некоторых случаях имеет смысл затормозить нагревание, например, оставить на ночь.
Во время нагревания колбу рекомендуется помещать на подставку так, чтобы ее ось была наклонена под углом от 30 до 45° к вертикали.
Многие методики предусматривают периодическое взбалтывание содержимого колбы во время разрушения органического вещества. В большинстве случаев такое взбалтывание можно устранить, положив в колбу стеклянные шарики диаметром 5-7 мм. Когда жидкость станет прозрачной, отсутствие дальнейшего изменения цвета не всегда указывает на полное разрушение органических веществ. Азот в некоторых устойчивых соединениях, таких как лизин, триптофан или тирозин, разрушается только при продолжении нагревания еще в течение от 30 до 90 мин после того, как жидкость станет прозрачной. Обычно бывает достаточным дополнительное нагревание в течение от 30 до 40 мин. Для любого продукта с одинаковой массой пробы продолжительность нагревания зависит как от вида нагревателя, так и от используемого катализатора.
Оптимальными являются такие условия нагревания, которые позволяют получить максимальные результаты по содержанию азота при устранении всех источников погрешности.
Во время нагревания горлышко колбы может быть частично перекрыто специальной грушеобразной стеклянной втулкой или подсоединено к паропоглотительному устройству. Такое устройство не должно задерживать кислоту, выплеснувшуюся при нагревании, и не должно быть загрязнено остатками от предыдущих анализов.
Во всех случаях рекомендуется во время охлаждения защищать содержимое колбы от любых аммиачных паров, которые могут присутствовать в этот момент в лаборатории.
Следовательно, для нагревания следует использовать любое газовое или электрическое устройство, которое не вызывает перегрева стенок колбы, не соприкасающихся с жидкостью, и которое способно обеспечить такое кипение, при котором испаряющаяся кислота будет осаждаться в средней части горлышка колбы Кьельдаля обычного типа. После того как жидкость станет прозрачной и не будет больше изменять цвет, нагревание следует продолжить еще не менее 30 мин.
3.4. Осаждение ртути
Если используемый катализатор содержит ртуть, ее следует осадить перед перегонкой аммиака.
Для осаждения ртути лучше всего использовать гипофосфит натрия или калия (NaH PO ; KН РO ), которые добавляют в сухом виде после разбавления среды и перед приведением ее в щелочное состояние.
На практике 1 г гипофосфита натрия или калия хватает для осаждения 1 г ртути.
Примечание. Осаждение ртути щелочными сульфидами или тиосульфатами может привести к выделению сероводорода или двуокиси серы, если при перемешивании эти вещества будут длительно находиться в соприкосновении с кислотой. Если эти газы попадут непосредственно в дистиллят, они нейтрализуют часть аммиака, что приведет к погрешности, снижающей результат.
4. ПЕРЕГОНКА АММИАКА
4.1.1. Можно использовать любой перегонный аппарат, удовлетворяющий требованиям контрольных испытаний.
Различают два вида перегонных аппаратов:
а) аппараты, позволяющие осуществлять непосредственную перегонку аммиака без переноса раствора серной кислоты, содержащегося в колбе с пробой;
б) аппараты, предусматривающие перенос раствора серной кислоты целиком или частично.
4.1.2. Перегонка аммиака может осуществляться различными методами, а именно:
а) простая перегонка после разбавления водой;
б) перегонка с водяным паром с термоизоляцией или вспомогательным нагревом сосуда с перегоняемым раствором.
в) перегонка с перегретым паром, не требующая вспомогательного нагрева.
4.1.3. Каждый аппарат должен иметь устройство для конденсации пара и сбора аммиачных паров. Допускается использовать любые типы аппаратов при условии прохождения ими проверочных испытаний, указанных в п.6.3.
Аппарат должен отвечать следующим требованиям:
а) не допускать никаких потерь аммиака, который может испаряться в атмосферу при добавлении щелочи или утекать при перегонке;
б) обеспечивать полную перегонку аммиака;
в) не допускать случайного переброса раствора гидроокиси натрия, капли которого должны задерживаться специальной ловушкой.
4.2. Добавление щелочи
При любом типе аппарата минерализат необходимо разбавить водой и затем добавить достаточное количество раствора гидроокиси натрия.
Если трудно определить количество серной кислоты, оставшейся в колбе, следует добавить количество раствора гидроокиси натрия, соответствующее общему количеству серной кислоты.
Например, на 12 см серной кислоты добавляют 45-50 см раствора гидроокиси натрия.
Добавлять этот раствор следует осторожно, по стенке, так как смесь сильно разогревается и на некоторых аппаратах возможна потеря аммиака или повреждение аппарата вследствие выплескивания горячей щелочной жидко
Перегонку проводят в соответствии с условиями использования данного аппарата.
Следует удостовериться в том, что перегонка аммиака завершена полностью и дистиллят не содержит избытка щелочи вследствие переброса гидроокиси натрия. Для этого рекомендуется одновременное титрование.
Однако различные методики рекомендуют использовать разные способы определения конечной точки перегонки. Например, по объему собранного дистиллята или объему остатка после перегонки, или продолжительности перегонки. Эти показатели не имеют прямого отношения к количественной перегонке аммиака. Они могут быть приняты только в случае, если испытания показали, что данная перегонка является полной при указанных условиях. Рекомендуется всегда подтверждать конец перегонки при каждом анализе.
5. ТИТРОВАНИЕ
5.1. Способы титрования
5.1.1. Одновременное титрование
Одновременное титрование также дает возможность определить, имел ли место переброс раствора гидроокиси натрия, и, если имел, результаты титрования теряют свое значение. В этом случае результат признают недействительным и анализ проводят вторично.
Контрольный анализ, проводимый путем перегонки смеси воды с гидроокисью натрия, может подтвердить наличие такого переброса.
Количественное определение общего азота по методу Кьельдаля
Наиболее распространенным методом определения общего азота в биологическом материале является метод Кьельдаля. Основное его достоинство заключается в том, что он позволяет определить суммарный азот с высокой точностью. Несмотря на ряд модификаций, которые претерпел метод за свою историю, он, сохранив специфичность, стал стандартным методом определения азота. Однако из-за того, что отдельные участки его трудно поддаются автоматизации, метод и в настоящее время остается довольно трудоемким и длительным.
Принцип действия. При определении общего азота по Кьельдалю органическое вещество минерализуют при высокой температуре концентрированной серной кислотой. При этом органическое вещество окисляется в присутствии катализатора до СО2 и Н2О, а весь азот переходит в аммиак и связывается с серной кислотой, образуя сульфат аммония:
органическое (NН4)2SО4 +СО2 + Н2О
Раствором щелочи нейтрализуют избыток серной кислоты и высвобождают из сернистого аммония аммиак:
(NН4)2SО4 + 2NаОН Nа2SО4 + 2 NН3 + 2 Н2О,
который затем отгоняется с парами воды и улавливается стандартным раствором борной кислоты.
При взаимодействии аммиака и кислоты образуется борат аммония NН4Н2ВО3:
Борат титруют стандартным раствором серной кислоты, причем избыток Н3ВО3 не мешает определению:
Отгон аммиака давлением водяных паров и титрование ведут на приборе конструкции В.М. Сереньева (см. рисунок 2), где можно совместить две заключительные стадии с целью ускорения определения азота.
Используемые для сжигания исследуемого материала катализаторы должны содержать сернокислый калий для повышения температуры сжигания вещества до оптимального значения.
Из-за трудоемкости процедуры выделения белка в анализируемой практике часто определяют так называемый сырой белок (сырой протеин), используя данные по содержанию общего азота (белкового и небелкового), считая его условно белковым. Так как содержание азота в белках колеблется в довольно широких пределах, а в среднем составляет 16%, то для пересчета азота на белок часто берут усредненный коэффициент – 6,25 (100:16 = 6,25). Этот коэффициент не является постоянным и в зависимости от содержания азота в белке у разных культур может изменяться от 5,3 до 6,25. Например, для пшеницы, ржи используют коэффициент 5,7 (100:17,5= 5,7). В целях получения сравнимых данных необходимо обязательно указывать коэффициент пересчета (N умножить на коэффициент пересчета).
Ход работы. 0,3- 0,5 г исследуемого воздушно-сухого материала отвешивают в маленькой пробирке (0,5х3 см), которую затем вставляют в резиновую трубку нужного диаметра и переносят в колбу Кьельдаля, вводя пробирку почти до основания перевернутой вверх дном колбы и опрокидывая всю систему. По разности масс пробирки с навеской и пустой пробирки (после переноса) определяют массу навески для анализа. В колбу добавляют 0,5 ± 0,05г смешанного катализатора и приливают цилиндром или дозатором 10 мл концентрированной Н2SO4. Перемешивают содержимое колбы (без встряхивания), закрывают ее стеклянной полой грушевидной втулкой или воронкой и ставят в наклонном положении (примерно 45 0 ) в гнездо нагревателя в вытяжном шкафу. Колбу осторожно нагревают, снимая или уменьшая нагрев на некоторое время каждый раз, когда обугливаемое вещество начинает сильно пениться от выделяющихся газов, в том числе оксида серы (IV). После прекращения вспенивания можно усилить нагрев до слабого непрерывного кипения. Ввиду возможных потерь азота, вследствие разложения бисульфата аммония (сернокислый аммоний разлагается на аммиак и бисульфат при 355 0 С) необходимо следить, чтобы в процессе сжигания горло колбы всегда оставалось холодным, а также за тем, чтобы на стенках колбы не оставалось темных пятен, смывая их горячей кислотой, придав колбе наклонное положение. Когда содержимое колбы приобретает зеленовато-голубой цвет без желтого оттенка, ее кипятят еще около 20 минут, после чего в охлажденную на воздухе колбу добавляют небольшое количество воды для удаления следов кислоты со стеклянной втулки и внутренней стороны верхней части колбы, закрывают колбу резиновой пробкой или герметизируют другим способом и оставляют до определения азота. Отгон аммиака производят на приборе Сереньева (см. рисунок 2).
Рисунок 2 – прибор Сереньева для определения азота
Методика работы на приборе Сереньева. После заполнения бюретки титрованным раствором до нулевой отметки, подачи воды к водоструйному насосу и холодильнику барботера 7 и подключения электродов подготовленного к работе сосуда через ЛАТР 9 в сетьзакрывают краны в следующей последовательности: нижний барботера 7, затем верхний, сообщая барботер с реактором 8 и, наконец, кран реактора 6. В барботер 3 вносят из бюретки 5 примерно 1/4 часть (1-2 мл) предполагаемого для титрования стандартного раствора 0,02н серной кислоты, содержащей индикатор Гроака.
В реактор 1 через фиксированную воронку подают минерализованный образец, обеспечив полноту переноса и отсутствие следов кислоты на воронке дистиллированной водой. При этом следят за тем, чтобы объем перенесенной жидкости был как можно меньшим, поскольку в этом случае время анализа уменьшается. Осторожно добавляют 33%-ный раствор гидроксида натрия до почернения смеси (работают в защитных очках).
Поступление аммиака с парами воды из реактора в барботер должно сопровождаться синхронным добавлением титрованного раствора (обеспечивается вручную) до границы перехода окраски в барботере с зеленой до лиловой (промежуточная окраска – сероватого тона). Постоянство лиловой окраски в течение 20–60 с (временный интервал зависит от скорости отгонки) свидетельствует о конце титрования. В бюретке отмечают объем израсходованного стандартного раствора и показание заносят в лабораторный журнал.
По окончании работы отключают ЛАТР, открывают кран реактора 6, затем верхний кран барботера 8. После истечения жидкости из реактора промывают фиксированную воронку водой, закрывают верхний кран барботера 8, затем кран реактора 6 и заполняют реактор водой. Вновь открывают краны, сообщая систему с атмосферой, в последовательности реактор – барботер (верхний кран 6,8) – барботер (нижний кран 7) – предохранительная склянка. Отключают насос и перекрывают водопроводную воду для охлаждения. После слива жидкости из реактора и барботера извлекают подвижную часть затвора (пробку) крана, промывают кран водой, просушивают, смазывают борным вазелином и собирают кран.
Расчет содержания азота на сухое вещество в исследуемом материале проводится по формуле
, (2)
где N – содержание азота в пересчете на сухое вещество, %;
n – заданная нормальность титрованного раствора;
g – навеска анализируемой пробы, г;
W – влажность исследуемого вещества, %;
, (3)
где N – содержание азота в пересчете на воздушно-сухое вещество, %;
V– количество титрованного раствора, израсходованного на титрова- ние за вычетом поправки на реактивы (контрольная проба), мл;
g – навеска анализируемой пробы, г;
Содержание белка рассчитывают путем умножения полученных значений азота на соответствующий коэффициент пересчета.
Материалы и реактивы: зерно, мука, солод; концентрированный раствор серной кислоты; 33%-ный раствор гидроксида натрия; смешанный индикатор Гроака (см. приложение Б, п.6); титрованный 0,02н раствор серной кислоты с индикатором Гроака и борной кислотой (см. приложение Б, п.7); селеновый катализатор (см. приложение Б, п.8).
Оборудование: колбы Кьельдаля; универсальная индикаторная бумага; цилиндры на 5, 10 мл; стеклянные втулки, воронки; пипетки на 20 мл; стаканы на 100 мл; промывалки; бумажные фильтры; пробирки с резиновой трубкой; прибор Сереньева для отгонки аммиака, защитные очки.
органическое (NН4)2SО4 +СО2 + Н2О
(NН4)2SО4 + 2NаОН Nа2SО4 + 2 NН3 + 2 Н2О,
, (2)
, (3)