морула что это при эко
Почему происходит остановка развития эмбрионов?
В чём причина остановки развития эмбрионов?
Существуют несколько причин по которым женщина не получает долгожданный перенос эмбрионов во время проведения протокола ЭКО, потому что прекращается процесс их деления. Статистика утверждает что 15-20% оплодотворенных яйцеклеток останавливаются в своем делении в процессе размножения на стадиях 3-4 клетки на вторые сутки. Останавливается деление яйцеклеток – по причине естественного процесса. Природный естественный отбор, позволяющий предотвратить зарождение плода с генетическим отклонением.
Современная эмбриологическая лаборатория в которой они культивируются оснащена специальным оборудованием, которое позволяет осуществлять процесс деления яйцеклетки с отработанной до мельчайших подробностей технологическими тонкостями.
Опираясь на прогрессивные технологии и высокотехнологичное оборудование обеспечивающее стабильные условия культивирования и развитие эмбриона после переноса, причину остановки в развитии и их делении следует рассматривать исключительно в плоскости жизнестойкости самого генетического материала.
Развитие эмбриона при ЭКО поэтапно дням:
Дата когда проводится пункция яичников и производится забор сперматозоида донора называется нулевой датой дня. Начало срока формирования плода начинается от момента смешивания сперматозоидов и ооцитов в специальной подготовленной специалистами среде. Результат зачатия возможно увидеть после 17 часов, с момента смешиваний мужской и женской гаметы. После 18 часов возможно рассмотреть в стадии зиготы – эмбрион с женскими или мужскими ядрами. Новый сформированный плод имеет диплоидный набор хромосомы и полученный от родителя индивидуальный генотип.
На 2 сутки нахождения плода в зиготе начинается его разделение, его клеточный состав называют бластомером, этих клеток в норме наблюдают по 2-4.
На 3 день он должен выделить шесть или восемь бластомеров. Это решающий этап создания зародышей: при обнаружении генетических дефектов, ход дальнейшего процесса останавливается, и он перестает существовать. Связывают это с тем, что в первичные часы после оплодотворения эмбрион питается питательным веществом и энергией материнской клетки, в следующие часы у него должен включиться собственный механизм жизнеобеспечения. Если он имеет генетический дефект, значит механизм не включается и он погибает.
На 4 сутки развития эмбриона при ЭКО у него сформировывается 10-16 бластомеров, процесс переходит в этап морула. В природе, находясь в организме женщины в этот период характеризуется попаданием эмбриона из маточного прохода в проход полости в матки. За четвёртые сутки образования морула сформировывается полостной объем, в котором клетка разделяется на одну и вторую группу. Когда полостное пространство заполняет большую половину клетки, процесс превращения морулы перетекает в стадию бластоцисты.
На 5-6 день развития эмбриона при ЭКО они совершенно сформированы, именно в этот период врачи репродуктологи культивируют плод в полость матки. Физиология искусственного состава среды не позволяет им выживать до 6 суток. Объем бластоцист равномерно расширяется, следовательно истончается ее оболочка. Возможен ее разрыв и ожидаемый выход плода, полностью сформированного для внедрения в слой эндометрия. Врачи это называют хетчингом. В варианте когда толщина оболочки чрезмерно толстая и плод не имеет возможности прорвать её сам, ему помогают это сделать. Эта процедура называется вспомогательный хетчинг. При помощи вспомогательного хэтчинга можно извлечь плоды с самым высоким качеством, и даже продиагностировать их генотип перед проведением имплантации.
На 7 день после проведения протокола ЭКО он помещается в слой эндометрия находящийся в полостном пространстве маточной трубы. Наружные клетки перестраиваются в плаценту, а внутренние в тело будущего ребёнка.
На 8 день наружные поверхностные ткани клетки формируют множество трубчатых ворсинок называемых трофобластомой. При помощи них обеспечивается питательная среда плода и начинает поступать кислород. В этом периоде формирования плод называют гаструлой.
На 9 сутки он все дальше перемещается в слой эндометрия. Начинается процесс переноса плода — имплантации. Возможно кровотечение из поврежденных ооцитов.
На 10 день заканчивается этап имплантации и начинается формирование плаценты. На 11 день плацентарные макрофаги уже синтезируют ХГЧ.
На 13-14 день ХГЧ попадая в кровь и концентрируясь в ней до достаточного уровня чтобы определить факт долгожданного зачатия.
Остановка эмбриогенеза при ЭКО, причины
Выше перечислены множественные причины остановки или неправильного формирования эмбриона после проведения ЭКО. Основным пунктом по мнению учёных генетиков всё же является проблема генетической аномалией. Она проявляется на стадиях зиготы, на 3 день, после переноса плода в слой эндометрия.
Замершая беременность. Причина остановки развития беременности
Наблюдаются случаи невынашиваемости беременными своего плода. Останавливается развитие плода в первых днях триместра. Это говорит об абсолютном физиологическом характере остановки. Причина кроется в искусственном отборе, связанном с решением материнского организма. Другими словами, биологический фактор женщины анализирует произошедшее оплодотворение, и если плод имеет дефект, то организм перестает подпитывать такую беременность. Он принимает решение о переносе и прекращении процесса развития плода и его отторжении, чтобы не расходовать силы своего биологического ресурса. Этим объясняется остановка развития эмбрионов.
В процессе оплодотворения может участвовать немалое количество плодоносных яйцеклеток которые могут иметь изъяны в хромосомном строении с самого начала своего формирования. Эти возможные эмбриональные дефекты трудно перенести и выявить на начальном этапе формирования эмбрионов, а тем более их подкорректировать в процессе. Всё это называется расплатой за излишек биологического разнообразия.
Репродуктологи наблюдают случаи когда остановка беременности происходит до имплантационного момента: интеллект женского организма не принимает данные сигнальных посылов о наступлении беременности. В жизни женщины наступает обычный месячный цикл, начинается менструация. Беременность не наступает.
Эмбриологические аспекты ЭКО/ИКСИ
Яйцеклетки (ооциты) полученные во время трансвагинальных пункций в программе ЭКО
День 1. Эмбрионы — оплодотворенные яйцеклетки
День 2. Эмбрионы — классификация качества
Оценка качества эмбрионов по степени фрагментации (A. VanSteiterghemetal., 1995)
— Тип A — эмбрион отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (4А)
— Тип В — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В)
— Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С)
— Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D)
День 3. Эмбрионы
На 3-и сутки эмбрион уже состоит из 6-8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался как бы «по инерции», исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Если «генетическая книга», в которой закодирована программа нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион останавливается в развитии. Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов. Поэтому именно на стадии 4-8 бластомеров 4-19% эмбрионов останавливаются в развитии (так называемый «блок развития»).
День 4. Морула
На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 10-16 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются и поверхность эмбриона сглаживается (процесс компактизации) – начинается стадия морулы (от лат. Morulae – тутовая ягода). Именно на этой стадии invivo (в организме матери) эмбрион попадает из маточной трубы в полость матки. К концу 4-х суток развития внутри морулы постепенно образуется полость – начинается процесс кавитации.
День 5. Бластоцисты
Перенос бластоцисты (перенос на 5-е сутки) имеет большую частоту успешной имплантации, позволяя переносить меньшее количество эмбрионов высокого качества, снижать риск многоплодной беременности при увеличении частоты наступления беременности.
Развитие бластоцисты и имплантация
Вероятность формирования бластоцисты
Преимущества переноса бластоцисты в ЭКО
Вспомогательный хэтчинг
Одним из основных факторов, от которого зависит успех лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения является способность эмбриона имплантироваться в стенку матки.
Яйцеклетка человека и эмбрион на ранних стадиях развития окружены защитной двухслойной оболочкой (zona pellucida – блестящая оболочка).
Она играет очень важную роль:
Оболочка эмбриона может быть очень толстой и плотной, и это может мешать его нормальному прикреплению к стенке матки.
Считается, что у «лабораторных» эмбрионов может снижаться выделение специальных ферментов, которые растворяют оболочку, делают её тоньше, способствуя выходу эмбриона. Поэтому было разработано искусственное подобие хетчинга, которое так и назвали – вспомогательный хэтчинг.
Суть метода вспомогательного хетчинга – искусственное истончение блестящей оболочки эмбриона различными способами:
Для этой процедуры мы используем лазерный аппарат OCTAX Laser Shot ТМ (Германия).
OCTAX Laser Shot ТМ — это передовая лазерная технология для ВРТ с цифровым управлением, цифровой обработкой, использованием последних компьютерных технологий и оптики высокого качества.
Суть метода лазерного хетчинга — это использование лазерного луча, что позволяет сделать высокоточный надрез необходимого размера. Лазерный хэтчинг делается только эмбрионам, предназначенным для переноса. Для этого эмбрион фиксируется микропипеткой и высокоточным лазером делается небольшое отверстие в наружной части его оболочки или несколько насечек для истончения ее слоя.
Лазерный хэтчинг практикуется в ведущих центрах всего мира. Исследования утверждают, что его использование повышает шансы наступления беременности (для пациентов которым показана эта процедура). Нет никаких данных о негативном влияние хэтчинга на результат программы лечения бесплодия, эта процедура абсолютно безопасна для самого эмбриона.
Лазерный хэтчинг назначается:
Криоконсервация эмбрионов
Одной из стремительно развивающихся технологий является замораживание или криоконсервация эмбрионов и яйцеклеток с последующим долговременным хранением. Первая беременность, полученная при переносе замороженных эмбрионов человека, наступила ещё в 1983 году. С этого момента технологии криконсервации совершенствовались, отрабатывались и проверялись исследователями и временем. Было установлено, что заморозка не ухудшает качества эмбрионов, но и не улучшает его. Только здоровые, крепкие эмбрионы переживают режим «заморозка / оттаивание».
Что же дает эта процедура пациентам, нужна ли она?
Конечно, нужна, особенно если в цикле ЭКО остаются «неперенесенные» эмбрионы хорошего качества. Такой случай возможен по нескольким причинам.
Во-первых, когда на пункции яичников было получено большое количество яйцеклеток, а в последствии и нормальных, жизнеспособных эмбрионов. Кстати, такой исход возможен не всегда, и пара которой предложили криоконсервацию — счастливчики.
Это дает некую подстраховку и уверенность в будущем. При удачной попытке в цикле стимуляции хранящиеся эмбрионы можно использовать для рождения второго и третьего ребенка, а в случае неудачи — повторить попытку в естественном цикле без большой гормональной нагрузки и операции.
Криоконсервации можно подвергнуть и яйцеклетки. Особенно это актуально в том случае, когда женщина планирует отсрочить материнство до наступления более подходящих социально-экономических условий. С возрастом организм женщины все хуже откликается на гормональную стимуляцию, и получить достаточное количество яйцеклеток хорошего качества не всегда возможно. Новые технологии дают возможность сохранить фертильность пациентам, планирующим химио- и радиотерапию. Криоконсервация в этих случаях дает возможность сохранить молодые, более здоровые яйцеклетки, и в последующем родить своего биологического ребенка.
Методов криоконсервации на сегодняшний день разработано несколько. В эмбриологической лаборатории центра «Тонус МАМА» используется метод ультра быстрого замораживания — витрификация по методу доктора М. Куваямы. Эмбриологи «Тонус МАМА» считают именно его наиболее эффективным, опираясь на многочисленные статистические исследования мирового уровня. Этот метод используется в клинической практике с 2000 года.
При витрификации (от лат. vitrum — стекло и facio — делаю, превращаю) происходит охлаждение до температуры жидкого азота, и переход яйцеклеток и эмбрионов в твердое, стекловидное состояние. Такой особенный вид заморозки возможен благодаря действию специальных веществ — криопротекторов.
Но криопротекторы — это не естественные для клеток составляющие, они токсичны. Чтобы криопротекторы в меньшей степени успели проявить свою токсичность, процедура витрификации проводится достаточно быстро, в чем и состоит преимущество этого метода заморозки. Только эмбрионы и яйцеклетки, застывшие в виде аморфной стекловидной массы, могут долго сохранять жизнеспособность, а при осторожном размораживании их жизнедеятельность полностью восстанавливается, что повышает возможность наступления беременности.
Полное освобождение от криопротекторов происходит приблизительно за 3 часа. По прошествии этого времени эмбрион полностью восстанавливается и готов для переноса в полость матки, а яйцеклетка к процедуре оплодотворения методом ИКСИ.
Особенностью криоконсервации является уплотнение оболочки яйцеклетки или эмбриона, но эта проблема легко решается. В случае разморозки эмбриона проводят вспомогательный хэтчинг (дополнительное рассечение оболочки для выхода из нее эмбриона и удачной имплантации в эндометрий). А в случае яйцеклеки проводят оплодотворение при помощи ИКСИ, и также вспомогательный хэтчинг развившемуся эмбриону.
Таким образом, витрификация позволяет:
Все это значительно увеличивает результативность процедуры ЭКО, сокращает ее стоимость и затрачиваемое время и дает возможность оказать помощь большему количеству семей, желающих иметь ребенка.
Фотографии эмбрионов человека, полученные на различных этапах витрификации
1 — эмбрион до криоконсервации;
2, 3, 4 — так выглядит эмбрион при температуре жидкого азота (−196 °C) — его клетки сильнее обезвожены, но живы;
5 — восстановление размера клеток эмбриона после разморозки (оттаивания).
Записаться на прием к акушеру-гинекологу, репродуктологу вы можете по телефону 8 (831) 411-11-20
Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО
Несмотря на то что результативность программ ЭКО зависит от множества факторов, главным и решающим этапом, практически определяющим успешность программы, является эмбриологический. А так как различные манипуляции с эмбрионом человека – это передний край современной науки, можете представить себе сложность терминологии, которую используют эмбриологи в своей повседневной деятельности. Ясности не добавляет и обилие различных классификаций и методов оценки качества используемых клеток.
Мы постараемся доступным языком объяснить, что подразумевается под непонятными сочетаниями букв и цифр и дать понимание того, на основе каких данных врачи принимают решения и дают прогнозы на исход программ ЭКО.
Главный эмбриолог, к.б.н.
Хотим сразу предупредить — ни в коем случае не стоит забывать, что для того, чтобы самостоятельно оценить перспективы и принять решение о переносе эмбриона нужно быть настоящим специалистом, имеющим помимо специального образования достаточный опыт.
В каждом конкретном случае решение и прогноз основывается на совокупности всех известных данных и чаще всего является коллективным решением врача и эмбриолога. Главная сложность состоит в том, что каждому этапу развития эмбриона соответствует своя система оценки качества и способ записи этой оценки. И для того чтобы понимать обозначения вроде «8с» необходимо хотя бы немного разобраться в содержании этих этапов и сопутствующих терминах.
День первый
На первом этапе эмбриолог оценивает признаки оплодотворения после проведенной процедуры ЭКО, ИКСИ, ИМСИ или PICSI. На этом этапе в эмбрионе оценивают наличие, количество, симметричность, внутреннее строение и внешний вид пронуклеусов.
Пронуклеусы — это ядра мужской и женской половых клеток еще не слившихся и несущих одинарный набор хромосом.
По их количеству и внешнему виду оценивают жизнеспособность эмбриона и перспективы возникновения патологий. В норме их должно быть два, они должны иметь относительно равные размеры, находиться рядом и иметь внутри «ядрышки» — пронуклеоли тоже в определенном количестве и расположенные определенным образом. На этом этапе может формироваться множество патологий, например, при присутствии только одного пронуклеуса оплодотворение и не сможет произойти, ведь именно это образование и есть носитель генетического материала, а без участия противоположного пола размножаться мы еще не научились. Пронуклеусов может оказаться и три. Такие эмбрионы часто несут аномальный, тройной набор хромосом и нежизнеспособны. Обычно они погибают до имплантации (прикрепления к стенке матки) или приводят к замершей беременности. Такие эмбрионы отбраковываются и не используются в программах ЭКО.
День второй
Вторые сутки знаменуются соединением ядер женской гаметы и мужской, а также процессом дробления зиготы, которая на этой стадии становится эмбрионом. Численность бластомеров (эмбриональных клеток) – 2–4, но их объем не увеличивается.
Дробление эмбрионов оценивается специалистом по таким критериям:
Уровень фрагментации и численность бластомеров классифицируется по типам следующим образом:
Самый качественный эмбрион — 4А, где 4 — количество бластомеров, А — отсутствие фрагментации.
Эмбрион на второй день
День третий
Продолжается дробление эмбриона, у которого насчитывается от 4 до 9 бластомеров. В начале третьего дня развития запускается собственная генетическая программа, которая в некоторых случаях содержит «опечатки». До этого эмбрион для своего роста «пользуется» веществами, накопленными яйцеклеткой во время ее созревания. Если эмбрион имеет мутации в программе («блок развития»), то далее он не развивается. Это происходит примерно в 20% случаях.
Причиной «блока развития» может быть низкокачественная семенная жидкость или яйцеклетка. Изначальное неудовлетворительное развитие эмбриона свидетельствует о проблемах с яйцеклеткой, если эмбрион «страдает» с третьих суток культивирования, то сперма была ненадлежащего качества. «Блок развития» – это так называемый естественный отбор, эволюционный спасительный механизм, который останавливает развитие некачественных эмбрионов. Как в дальнейшем будет развиваться и расти эмбрион зависит от сформированного генома и своевременности начала его функционирования.
Эмбрион на третий день
День четвертый
К этому сроку эмбрион содержит до восьми бластомер. Клетки контактируют значительно активнее, поверхность у эмбриона немного сглаживается. Культивирование эмбриона третьи сутки характеризуется началом такого процесса, как компактизация, когда границы эмбриональных клеток различить невозможно. Компактизация бывает частичная или полная. Если этот процесс произошел на второй день, то возможно эмбрион развивается неправильно, с отклонениями, что отображается в эмбриологическом протоколе. Готовится переход эмбриона в бластоцисту.
В моруле (трехдневный эмбрион) содержится до 16 бластомеров.
При естественном зачатии на этом сроке эмбрион транспортируется из фаллопиевых труб в матку. По окончании четвертых суток происходит кавитация, когда внутри эмбриона образуется пустота. В процессе эмбрионального роста за пределы зародышевой оболочки выходит определенное количество клеток. Эти клетки при необходимости генетического исследования забирают на анализ. Диагностику проводит эмбриолог на 5–6 сутки, прокалывая зародышевую оболочку. Биопсия абсолютно безопасна для эмбриона и не вредит его развитию. До получения диагностических данных эмбрионы криоконсервируют.
Результаты исследования напрямую повлияют на дальнейшую «судьбу» эмбриона, характеристики которого никак не меняются после размораживания. Современные безопасные технологии замораживания биоматериала позволили широко внедрить в различные программы ВРТ генетическую диагностику. На четвертый день оценка эмбриона малоинформативна, но его можно оценить по численности компактизированных клеток. Чем больше таких клеток, тем вероятнее эмбрион станет бластоцистой.
Оценивание компактизации происходит по классам:
Не во всех лабораториях происходит оценка по такому критерию.
Четвертый день развития. Стадия морулы
День пятый
На данном этапе, включающем период с конца четвертого до начала шестого дня, морула, полость которой составляет половину своего объема, становится бластоцистой, состоящей из двух типов клеток:
Ооцит окружен блестящей оболочкой плотной консистенции (Zona pellucida), выполняющей две функции: она препятствует проникновению в яйцеклетку более одного спермия и удерживает вместе бластомеры. По мере роста внутриэмбриональная полость расширяется, приводя к разрыву оболочки, в результате чего происходит выход бластоцисты или «хэтчинг» (вылупление). На этом этапе оценка эмбриона происходит по таким критериям:
Качество обозначается цифрами (1–5), количество — буквами (А-С).
На пятый день бластоцисты переносят в матку или замораживают. Бластоцисты оценивают по степени зрелости (бластуляция):
Шестой день развития. Стадия бластоцисты
Оценка эмбриобласта
Важнейший критерий внутриклеточной массы (ВКМ) – плотность, сгруппированность. Эмбрион считается более качественным, если отмечается высокая плотность ВКМ.
Критерии трофэктодермы – количество и маленький размер:
Степень приживаемости эмбрионов в полости матки оценивают спустя две недели по исследованию крови на ХГЧ. Более достоверная информация будет получена с помощью УЗ-диагностики через три недели. Вероятность наступления беременности зависит во многом от качества имплантированных эмбрионов. Морфологические данные, используемые для оценивания эмбрионов, являются необходимыми и основными, но этого не всегда достаточно. Иногда при переносе высококачественных эмбрионов они не имплантируются. В других случаях при переносе эмбрионов невысокого качества наступает беременность. Поэтому эмбриологи используют дополнительные варианты оценивания, позволяющие спрогнозировать имплантацию.
Развитие эмбрионов является сложным трудоемким процессом, в котором нужно учитывать массу тонких нюансов, что под силу только высокопрофессиональным специалистам. Если в ходе проведения программы ЭКО удалось довести 40% эмбрионов до этапа бластоцисты отличного качества, то программа считается успешной.
В этом плане криотехнологии, применяемые в протоколах ЭКО, неоценимы, поскольку есть возможность не только перенести в матку высококачественные эмбрионы, но и заморозить оставшиеся. Это преимущество позволяет использовать криозамороженный биоматериал при следующем переносе, минуя несколько небезопасных для здоровья и дорогостоящих этапов.
Данная статья не может быть использована для постановки диагноза, назначения лечения и не заменяет прием врача.